Plasmide Double Nickase (h) YAP: sc-400040-NIC

YAP1 code le coactivateur transcriptionnel YAP, un effecteur central de la voie de signalisation Hippo qui intègre la densité cellulaire, les signaux mécaniques et la polarité afin de contrôler la prolifération, l’apoptose et la taille des organes. Lorsque les kinases Hippo sont inactives, YAP s’accumule dans le noyau et s’associe aux facteurs de transcription de la famille TEAD pour réguler des programmes géniques liés à la croissance, au remodelage du cytosquelette et à la signalisation de la matrice extracellulaire. Une activité de YAP dérégulée est impliquée dans des altérations de l’inhibition de contact, des dynamiques épithélio-mésenchymateuses et des phénotypes de type « cellules souches », et elle est fréquemment étudiée en biologie du cancer, dans la fibrose et les processus régénératifs. YAP interagit également avec les voies GPCR, Wnt/β-caténine et TGF-β, ce qui fait de YAP1 un nœud utile pour cartographier les interactions entre voies et le remaniement des réseaux transcriptionnels.

YAP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus YAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de YAP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de YAP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de YAP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.