Plasmide Double Nickase (h) XRN1: sc-401910-NIC

XRN1 code une exoribonucléase 5′→3′ conservée qui pilote la dégradation cytoplasmique des ARNm en dégradant les ARN décapés (dépourvus de coiffe) après le décapping, façonnant ainsi le renouvellement des transcrits et le contrôle qualité des ARN. Elle agit au carrefour des complexes de décapping, des P-bodies et des voies de surveillance co-traductionnelles telles que la dégradation médiée par les codons non-sens (NMD), contribuant à coordonner les programmes d’expression génique lors des réponses au stress. En régulant la stabilité de transcrits spécifiques, XRN1 influence la signalisation de l’immunité innée et des réseaux plus larges du métabolisme des ARN, fréquemment perturbés dans des contextes cancéreux et neurodéveloppementaux. Une activité de XRN1 dérégulée a également été associée à des réponses antivirales altérées et à une sensibilité modifiée à la réplication des virus à ARN, ce qui en fait un point d’entrée utile pour étudier les interactions hôte–pathogène.

XRN1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus XRN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de XRN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de XRN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de XRN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.