Plásmido Doble Nickase (h) WT1: sc-400095-NIC

WT1 codifica un factor de transcripción con dedos de zinc que regula la especificación de linaje, el control del ciclo celular y la apoptosis mediante activación o represión transcripcional dependiente del contexto. Funciona en programas del desarrollo, en particular en tejidos urogenitales y hematopoyéticos, y se integra con vías que controlan la diferenciación y la plasticidad epitelio‑mesénquima mediante la modulación de redes de factores de crecimiento y de transcripción. WT1 también participa en el procesamiento de ARN a través de efectos específicos de isoforma sobre el empalme (splicing) y la unión a ácidos nucleicos, lo que contribuye a resultados regulatorios complejos. La desregulación de la expresión de WT1 o sus mutaciones está implicada en múltiples neoplasias y trastornos del desarrollo, por lo que se utiliza ampliamente como marcador y como nodo mecanístico en estudios de los circuitos transcripcionales oncogénicos y de la regulación del destino celular.

WT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus WT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de WT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de WT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con WT1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.