Wnt-6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423720

Descripción general

Wnt6 codifica Wnt-6, una glucoproteína secretada que actúa como un morfógeno de corto alcance en la señalización Wnt para regular la especificación del destino celular, la proliferación, la polaridad y el patrón tisular durante la embriogénesis y la homeostasis en el adulto. En sistemas murinos, Wnt-6 puede interactuar con complejos de receptores Frizzled/LRP para modular tanto la transcripción canónica dependiente de β-catenina como vías no canónicas que influyen en la remodelación del citoesqueleto y la migración direccional. La alteración de la actividad de Wnt6 perturba programas del desarrollo y la señalización epitelio–mesénquima, procesos que se estudian con frecuencia en modelos de organogénesis, regeneración y biología del cáncer. La desregulación de la señalización Wnt se asocia ampliamente con defectos congénitos y con la reconfiguración de vías en tumores, lo que convierte a Wnt6 en un nodo relevante para el análisis mecanístico de la vía.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Wnt-6 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Wnt6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Wnt6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Wnt6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Wnt-6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Wnt6 para la investigación de la señalización de Wnt-6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Wnt6 críticos para la función de Wnt-6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Wnt6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Wnt-6 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Wnt-6 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Wnt6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Wnt-6 (m) y el plásmido HDR Wnt-6 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Wnt6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Wnt6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.