Plasmide CRISPR d'Activation (m) Wnt-4: sc-423717-ACT

Wnt4 murin code Wnt-4, un ligand glycoprotéique sécrété qui régule les décisions de destinée cellulaire, la morphogenèse et la mise en place des patrons tissulaires via la signalisation WNT. Wnt-4 peut se lier aux complexes récepteurs Frizzled/LRP afin de moduler la transcription canonique dépendante de la β-caténine, ainsi que des voies non canoniques influençant la polarité, la migration et la dynamique du cytosquelette. Au cours du développement et dans l’homéostasie des tissus adultes, Wnt-4 contribue à l’organogenèse et aux programmes de différenciation ; une signalisation WNT4 dérégulée est impliquée dans des phénotypes urogénitaux congénitaux, des interactions épithélio-stromales aberrantes et un remodelage oncogénique des voies de signalisation dans de multiples contextes. Ces caractéristiques font de Wnt4 un nœud pertinent pour étudier les interactions entre voies de signalisation (crosstalk) avec TGF-β, Notch et MAPK, et pour disséquer les programmes transcriptionnels en aval de l’activation de WNT.

Wnt-4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Wnt4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Wnt-4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Wnt4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Wnt4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Wnt-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Wnt4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Wnt-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Wnt-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Wnt4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.