Wnt-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423715

Descripción general

Wnt3 codifica Wnt-3, un ligando glicoproteico secretado que inicia la señalización Wnt al unirse a los receptores Frizzled y a los correceptores LRP5/6 para regular la especificación del destino celular, la proliferación y el patrón tisular. En el ratón, Wnt-3 es un impulsor clave de los programas transcripcionales canónicos de β-catenina/TCF durante la embriogénesis temprana y la formación del eje, con efectos posteriores sobre la diferenciación y los procesos morfogenéticos. La actividad alterada de Wnt3 perturba las redes de señalización del desarrollo y puede contribuir a una salida desregulada de la vía, asociada a anomalías congénitas y a contextos oncogénicos de señalización Wnt/β-catenina. Como ligando de la vía, Wnt-3 también es relevante para estudiar la interacción (crosstalk) con las vías BMP, FGF y Notch en modelos de mantenimiento y diferenciación de células madre.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Wnt-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Wnt3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Wnt3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Wnt3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Wnt-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Wnt3 para la investigación de la señalización de Wnt-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Wnt3 críticos para la función de Wnt-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Wnt3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Wnt-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Wnt-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Wnt3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Wnt-3 (m) y el plásmido HDR Wnt-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Wnt3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Wnt3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.