Plásmido CRISPR de Activación (h) Wnt-10a: sc-403285-ACT

WNT10A codifica Wnt-10a, un ligando secretado de la familia Wnt que regula la especificación del destino celular, la proliferación y el patrón tisular mediante la señalización canónica β-catenina/TCF y vías Wnt no canónicas dependientes del contexto. La actividad de Wnt-10a influye en las interacciones epitelio–mesénquima y en los programas de diferenciación, con funciones destacadas en el desarrollo y el mantenimiento de apéndices ectodérmicos como los folículos pilosos y los dientes. La desregulación de la señalización de WNT10A se ha vinculado a displasias ectodérmicas congénitas y a defectos odontogénicos, y su expresión alterada también se estudia en cánceres, donde la remodelación de la vía Wnt afecta el comportamiento de las células tumorales y las respuestas del estroma. Como nodo de la vía, WNT10A se usa con frecuencia para investigar efectos específicos de ligandos Wnt sobre redes transcripcionales, morfogénesis y dinámica de células madre/progenitoras.

Wnt-10a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WNT10A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Wnt-10a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WNT10A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WNT10A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Wnt-10a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WNT10A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Wnt-10a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Wnt-10a en células tumorales con expresión de WNT10A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.