Plasmide CRISPR d'Activation (h) WNK1: sc-403420-ACT

WNK1 (with-no-lysine [K] kinase 1) code une kinase sérine/thréonine qui agit comme régulateur en amont du transport ionique et de l’homéostasie du volume cellulaire en modulant les cotransporteurs cation‑chlorure via l’axe de signalisation WNK–SPAK/OSR1. Elle intègre les signaux de stress osmotique afin de coordonner la gestion du NaCl, la dynamique du cytosquelette et le trafic vésiculaire, influençant ainsi le transport épithélial et l’excitabilité neuronale. WNK1 s’interface également avec des voies de signalisation liées aux MAPK et à PI3K, dont les effets sur la prolifération et la migration dépendent du contexte. Une dérégulation génétique ou de signalisation de WNK1 a été associée à des phénotypes de pression artérielle et à des processus liés aux neuropathies, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de l’équilibre électrolytique et de la signalisation de réponse au stress.

WNK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WNK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WNK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WNK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WNK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WNK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WNK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WNK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WNK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de WNK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.