WIBG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409500

Descripción general

PYM1 codifica la proteína humana WIBG, un componente de la biología de las ribonucleoproteínas mensajeras implicado en la coordinación de la regulación génica postranscripcional. WIBG se ha relacionado con procesos del metabolismo del ARN que influyen en la estabilidad de los transcritos y en la traducción, lo que favorece un control dinámico de la producción proteica en células en proliferación y en diferenciación. A través de estas funciones, WIBG se integra con vías que gobiernan la homeostasis del proteoma y las respuestas al estrés celular, que con frecuencia se ven alteradas en contextos relevantes para la enfermedad. La desregulación del procesamiento del ARNm y de la traducción se asocia a diversos estados patológicos, lo que convierte a WIBG en una diana útil para estudios mecanísticos del control de la expresión génica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO WIBG (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PYM1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PYM1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PYM1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína WIBG.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PYM1 para la investigación de la señalización de WIBG, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PYM1 críticos para la función de WIBG
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PYM1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido WIBG CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido WIBG CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PYM1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR WIBG (h) y el plásmido HDR WIBG (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PYM1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PYM1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.