WDR82 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406963-ACT

WDR82 (WD-Repeat-Domäne 82) kodiert ein WD40-Repeat-haltiges Protein, das als chromatinassoziierter regulatorischer Faktor wirkt und Transkription mit der RNA-Prozessierung verknüpft. Es wurde mit der promotorproximalen Kontrolle der Genexpression sowie der Koordination von Histonmodifikationszuständen in Verbindung gebracht, und zwar über Interaktionen mit nukleären Proteinkomplexen, die den Transkriptionsoutput prägen. Über diese Funktionen kann WDR82 Signalwege beeinflussen, die den Zellzyklusfortschritt, die Genomstabilität und stressresponsive Transkriptionsprogramme steuern. Eine dysregulierte Expression oder veränderte Funktion von WDR82 wurde in mehreren Kontexten der Krebs- und Entwicklungsbiologie berichtet, was seinen Nutzen als Ziel für mechanistische Studien zur epigenetischen Regulation und Transkriptionskontrolle unterstreicht.

WDR82 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen WDR82-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

WDR82 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des WDR82-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der WDR82-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen WDR82-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native WDR82-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von WDR82-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des WDR82-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem WDR82-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.