Plasmide Double Nickase (h) WDR77: sc-403890-NIC

WDR77 (également connu sous le nom de MEP50) code une protéine d’échafaudage à répétitions WD qui constitue un cofacteur indispensable de PRMT5, en soutenant la diméthylation symétrique de résidus arginine sur les histones et sur diverses protéines de liaison à l’ARN. Via ce complexe méthylosome PRMT5–WDR77, WDR77 influence l’organisation de la chromatine, le contrôle transcriptionnel et l’épissage du pré-ARNm, avec des effets en aval sur la progression du cycle cellulaire et les programmes de lignée. WDR77 a également été associé à la co‑régulation du récepteur des androgènes et, plus largement, à la signalisation des récepteurs nucléaires, ce qui le relie à des voies qui modèlent les états de prolifération et de différenciation. Une activité PRMT5/WDR77 dérégulée est fréquemment étudiée en biologie du cancer et dans des contextes développementaux où des défauts épigénétiques et de traitement de l’ARN contribuent à modifier les réseaux d’expression génique.

WDR77 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WDR77 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WDR77. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WDR77. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WDR77.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.