Plasmide CRISPR d'Activation (h) WAVE1: sc-401913-ACT

WASF1 code pour WAVE1, un composant central du complexe régulateur WAVE qui relie la signalisation de Rac1 à la nucléation de l’actine médiée par Arp2/3 et à l’assemblage de filaments ramifiés. WAVE1 coordonne la formation des lamellipodes, le plissement de la membrane (membrane ruffling) et la croissance des neurites, soutenant la migration cellulaire et l’architecture synaptique grâce à un remodelage dynamique du cytosquelette. Cette voie de signalisation croise les réseaux PI3K/Rho GTPases et les signaux d’adhérence pour façonner la polarité cellulaire et le trafic intracellulaire. Une dérégulation du contrôle de l’actine associé à WAVE1 a été impliquée dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, et une signalisation cytosquelettique altérée est également étudiée dans des contextes de comportement invasif et de biologie des cellules métastatiques.

WAVE1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WASF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WAVE1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WASF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WASF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WAVE1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WASF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WAVE1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WAVE1 dans les cellules tumorales présentant une expression de WASF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.