Date published: 2026-7-13
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The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
Cas9n Nickase gRNA Plasmid Targeting: Dual gRNA plasmids create single-strand nicks at precise DNA sequences for efficient genome editing using Cas9n Nickase.
Cas9n Nickase gRNA Plasmid Targeting: Dual gRNA plasmids create single-strand nicks at precise DNA sequences for efficient genome editing using Cas9n Nickase.
This image illustrates the Cas9n Nickase mechanism used for precise genome editing. Two plasmids (Plasmid 1 and Plasmid 2) are shown, each containing a targeted DNA sequence. The system utilizes single-guide RNAs (sgRNA) to direct Cas9n Nickase to specific genomic locations, represented by the blue and pink DNA strands. The sgRNA scaffold aids in guiding Cas9n to the 20 nucleotide (nt) target sequence on the DNA. Cas9n makes single-strand cuts at NCC and NGG sites, enabling precise gene modifications without creating double-strand breaks.
This image illustrates the Cas9n Nickase mechanism used for precise genome editing. Two plasmids (Plasmid 1 and Plasmid 2) are shown, each containing a targeted DNA sequence. The system utilizes single-guide RNAs (sgRNA) to direct Cas9n Nickase to specific genomic locations, represented by the blue and pink DNA strands. The sgRNA scaffold aids in guiding Cas9n to the 20 nucleotide (nt) target sequence on the DNA. Cas9n makes single-strand cuts at NCC and NGG sites, enabling precise gene modifications without creating double-strand breaks.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.

Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400013-NIC

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データシート
  • 対象生物種: human
  • 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
  • Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
  • ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
  • ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
  • Waf1/Cip1/CDKN1A p21ダブルニカースプラスミド（h）およびWaf1/Cip1/CDKN1A p21ダブルニカースプラスミド（h2）は、CDKN1Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
  • トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Waf1/Cip1/CDKN1A p21 抗体 (F-5): sc-6246
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    注文情報

    製品名カタログ #単位価格数量お気に入り

    Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickaseプラスミド (h)

    sc-400013-NIC
    20 µg
    		$410.00

    Waf1/Cip1/CDKN1A p21 Double Nickaseプラスミド (h2)

    sc-400013-NIC-2
    20 µg
    		$410.00

    CDKN1Aはp21（Waf1/Cip1）をコードしており、p21はストレスシグナルを統合してG1/Sチェックポイントで細胞周期の進行を抑制するサイクリン依存性キナーゼ阻害因子である。DNA損傷に応答してp53により強く誘導され、p21はCDK2およびCDK1関連複合体を阻害するとともに、PCNA依存的なDNA複製および修復を調節する。これらの相互作用を通じて、p21は老化、一過性の細胞周期停止、ならびに遺伝毒性ストレス下での細胞運命決定に影響を及ぼす。CDKN1A/p21シグナルの制御破綻は、がん化や腫瘍抑制経路の破綻にしばしば関与するとされ、また複製ストレス耐性や治療誘導性老化モデルなどのプロセスにも関連する。

    Waf1/Cip1/CDKN1A p21 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDKN1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDKN1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDKN1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

    編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDKN1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

    研究用のみ。診断用または治療用ではありません。

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