Plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS51 (h): sc-410709

Présentation

VPS51 code une sous-unité centrale du complexe d’amarrage GARP (Golgi-associated retrograde protein), associé à l’appareil de Golgi, qui assure le trafic rétrograde des endosomes vers le réseau trans-golgien (TGN). En favorisant la capture des vésicules et leur fusion dépendante des SNARE au niveau du TGN, VPS51 contribue au maintien de l’organisation du Golgi et au bon recyclage des récepteurs de tri et des protéines cargo. Une altération de la fonction de GARP perturbe l’homéostasie endolysosomale, le tri des protéines et les voies de maturation dépendantes de la glycosylation, avec des effets en aval sur les réponses cellulaires au stress. Un trafic rétrograde modifié est pertinent dans des modèles de neurobiologie, de signalisation immunitaire et de phénotypes prolifératifs, où l’intégrité du transport membranaire influence la disponibilité des récepteurs et les sorties de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS51 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VPS51 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VPS51, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VPS51 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VPS51.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VPS51 pour l'étude de la signalisation de VPS51, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VPS51 essentiels à la fonction de VPS51
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VPS51 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VPS51 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VPS51 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VPS51. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VPS51 plasmide HDR (h) et le VPS51 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VPS51 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VPS51 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.