Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide Double Nickase (h) VPS39: sc-404507-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) VPS39 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide VPS39 Double Nickase (h) et le plasmide VPS39 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant VPS39. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: VPS39 Antibody (C-5): sc-514762
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) VPS39 | sc-404507-NIC | 20 µg | $410.00 |
VPS39 code une sous-unité centrale du complexe d’arrimage HOPS (Homotypic Fusion and Vacuole Protein Sorting), qui coordonne les événements de fusion entre endosome tardif et lysosome, ainsi qu’entre autophagosome et lysosome. Grâce à ses interactions avec les GTPases Rab et la machinerie SNARE, VPS39 contribue à la maturation endolysosomale, à l’acheminement des cargos vers les lysosomes, et au renouvellement des protéines membranaires et des organites. La perturbation du trafic dépendant de HOPS dérègle l’homéostasie lysosomale et le flux autophagique, des processus associés à la neurodégénérescence, à la biologie des infections et à l’adaptation des cellules tumorales au stress. Par conséquent, VPS39 est largement étudié dans les voies qui contrôlent la dégradation intracellulaire, la dynamique des organites et la signalisation à partir des compartiments endolysosomaux.
VPS39 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VPS39 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VPS39. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VPS39. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VPS39.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.