VpreB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423685

Übersicht

Vpreb3 kodiert VpreB3, ein mit der Surrogat-Leichtkette verwandtes Protein, das während der B‑Zellentwicklung an der Immunglobulinassemblierung sowie an Qualitätskontrollmechanismen beteiligt ist. In sich entwickelnden Zellen der B‑Linie ist VpreB3 mit der Proteostase des endoplasmatischen Retikulums (ER) und dem Umgang mit Komponenten der Immunglobulin‑Leichtkette verknüpft und beeinflusst dadurch die Reifung des Prä‑B‑Zell‑Rezeptors sowie die nachgeschaltete Signalgebung. Eine veränderte Regulation dieses Signalwegs kann Differenzierungszustände von B‑Zellen, die Bildung des Antikörperrepertoires und zelluläre Stressantworten im Zusammenhang mit ER‑assoziierten Verarbeitungsprozessen beeinflussen. Diese Eigenschaften machen Vpreb3 zu einem nützlichen Ziel, um in Mausmodellen Mechanismen der B‑Zellreifung und der Immunglobulinbiosynthese zu untersuchen.

Das VpreB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vpreb3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vpreb3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vpreb3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VpreB3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vpreb3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VpreB3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vpreb3-Exone abzielen, die für die VpreB3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vpreb3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VpreB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VpreB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vpreb3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VpreB3 HDR-Plasmid (m) und VpreB3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vpreb3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vpreb3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.