von Willebrand Factor/VWF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423690

Panoramica

Vwf codifica per il fattore di von Willebrand (VWF), una grande glicoproteina multimerica sintetizzata dalle cellule endoteliali e dai megacariociti e immagazzinata nei corpi di Weibel–Palade e nei granuli α piastrinici. Il VWF media l’adesione e l’aggregazione piastrinica in condizioni di elevato shear collegando il collagene subendoteliale esposto alla glicoproteina piastrinica Ib/IX/V, e stabilizza il fattore VIII della coagulazione in circolo. La sua secrezione regolata e l’elaborazione dei multimeri integrano l’attivazione endoteliale, le interazioni con la matrice extracellulare e le reti di proteasi emostatiche che coordinano l’emostasi primaria. La disregolazione dell’abbondanza di VWF, della distribuzione dei multimeri o della sua clearance altera l’equilibrio trombo-infiammatorio ed è associata a fenotipi emorragici e trombotici rilevanti per modelli di danno vascolare, infiammazione e disfunzione endoteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO von Willebrand Factor/VWF (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vwf in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vwf insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vwf a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina von Willebrand Factor/VWF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vwf per lo studio della segnalazione di von Willebrand Factor/VWF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vwf critici per la funzione di von Willebrand Factor/VWF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vwf per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vwf. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal von Willebrand Factor/VWF Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR von Willebrand Factor/VWF (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vwf per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vwf definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.