von Willebrand Factor/VWF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423690

Descripción general

Vwf codifica el factor von Willebrand (VWF), una gran glucoproteína multimérica sintetizada por células endoteliales y megacariocitos, y almacenada en los cuerpos de Weibel–Palade y en los gránulos α de las plaquetas. El VWF media la adhesión y la agregación plaquetarias en condiciones de alto cizallamiento al actuar como puente entre el colágeno subendotelial expuesto y la glucoproteína plaquetaria Ib/IX/V, y además estabiliza el factor VIII de la coagulación en la circulación. Su secreción regulada y el procesamiento de sus multímeros integran la activación endotelial, las interacciones con la matriz extracelular y las redes de proteasas hemostáticas que coordinan la hemostasia primaria. La desregulación de la abundancia de VWF, de la distribución de multímeros o de su depuración altera el equilibrio tromboinflamatorio y se asocia con fenotipos hemorrágicos y trombóticos relevantes en modelos de lesión vascular, inflamación y disfunción endotelial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO von Willebrand Factor/VWF (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vwf en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vwf junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vwf tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína von Willebrand Factor/VWF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vwf para la investigación de la señalización de von Willebrand Factor/VWF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Vwf críticos para la función de von Willebrand Factor/VWF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vwf para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vwf. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR von Willebrand Factor/VWF (m) y el plásmido HDR von Willebrand Factor/VWF (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vwf para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vwf definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.