Plásmido CRISPR de Activación (h) von Willebrand Factor/VWF: sc-400217-ACT

VWF codifica el factor von Willebrand, una gran glucoproteína multimérica producida por células endoteliales y megacariocitos que es esencial para la hemostasia primaria. VWF media la adhesión de las plaquetas al colágeno subendotelial expuesto bajo condiciones de alto estrés de cizallamiento y estabiliza el factor VIII de la coagulación, vinculando el anclaje plaquetario con la cascada de coagulación intrínseca. La proteína se almacena en los cuerpos de Weibel–Palade y en los gránulos α plaquetarios, y se regula mediante el procesamiento y la escisión de multímeros, lo que influye en la trombosis y la integridad vascular. La desregulación o la variación genética en VWF se asocia con fenotipos hemorrágicos y trombóticos y se estudia ampliamente en biología endotelial, función plaquetaria e investigación de las vías de coagulación.

von Willebrand Factor/VWF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VWF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

von Willebrand Factor/VWF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VWF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VWF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de von Willebrand Factor/VWF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VWF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de von Willebrand Factor/VWF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía von Willebrand Factor/VWF en células tumorales con expresión de VWF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.