Plasmide Double Nickase (h) Von Hippel Lindau/VHL: sc-400528-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Von Hippel Lindau/VHL correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Von Hippel Lindau/VHL Double Nickase (h) et le plasmide Von Hippel Lindau/VHL Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant VHL. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Von Hippel Lindau/VHL Antibody (VHL40): sc-135657
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Von Hippel Lindau/VHL | sc-400528-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Von Hippel Lindau/VHL | sc-400528-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VHL code le suppresseur de tumeur von Hippel–Lindau, la sous-unité de reconnaissance du substrat d’un complexe E3 ubiquitine‑ligase de type Cullin‑2–RING, qui cible HIF‑α hydroxylé pour son ubiquitination puis sa dégradation par le protéasome en conditions de normoxie. En couplant la détection de l’oxygène au contrôle transcriptionnel de programmes d’angiogenèse, de métabolisme, d’érythropoïèse et de matrice extracellulaire, VHL contribue au maintien de l’homéostasie cellulaire et à des réponses appropriées à l’hypoxie. La perte ou le dysfonctionnement de VHL perturbe la signalisation de HIF et reconfigure des voies liées à la biologie vasculaire, au métabolisme mitochondrial et à la protéostasie. Les altérations de VHL sont étroitement associées à la maladie héréditaire de VHL et sont fréquemment étudiées dans des modèles de carcinome rénal à cellules claires afin d’explorer la biologie tumorale dépendante de l’hypoxie et l’adaptation au microenvironnement.
Von Hippel Lindau/VHL Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VHL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VHL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VHL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VHL.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.