VMP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405940-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das VMP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- VMP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und VMP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf VMP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
VMP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405940-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VMP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405940-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VMP1 (Vacuolenmembranprotein 1) ist ein integrales Membranprotein, das die Initiierung der Autophagie und die Biogenese von Autophagosomen unterstützt, mit wichtigen Funktionen bei der Bildung des Phagophors und der Membranumbauprozesse an Kontaktstellen zwischen Organellen. Es koordiniert die Mobilisierung von Lipiden und die Organellendynamik, die die Kommunikation zwischen ER und Autophagosom, die Anpassung an zellulären Stress sowie intrazelluläre Qualitätskontrollwege beeinflussen. Über seinen Einfluss auf den autophagischen Flux wirkt sich VMP1 auf die Proteostase, die mitochondriale Homöostase und inflammatorische Signaloutputs aus, die das Zellüberleben und den metabolischen Zustand mitprägen. Eine veränderte Regulation von VMP1 wurde in Zusammenhängen mit fehlregulierter Autophagie untersucht, darunter Tumorbiologie und stressassoziierte Reaktionen bei Neurodegeneration, was VMP1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen macht.
VMP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des VMP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von VMP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die VMP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit VMP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.