Vigilin Double Nickase Plasmid (h): sc-404125-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Vigilin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Vigilin Double-Nickase-Plasmid (h) und Vigilin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HDLBP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Vigilin: sc-271523
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Vigilin Double Nickase Plasmid (h) | sc-404125-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Vigilin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404125-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **HDLBP** kodiert **Vigilin**, ein multifunktionales RNA-bindendes Protein mit mehreren KH-Domänen, das mit mRNP-Komplexen assoziiert und dadurch die **Stabilität**, **subzelluläre Lokalisation** und **Translation** von mRNA reguliert. Vigilin ist an posttranskriptionellen Kontrollprogrammen beteiligt, die mit der Homöostase von Lipiden und Lipoproteinen verknüpft sind, einschließlich der Regulation von Transkripten, die am Cholesterinstoffwechsel und an metabolischen Stressantworten beteiligt sind. Durch die Kopplung des RNA-Stoffwechsels an zelluläre Wachstums- und Anpassungswege wurde eine veränderte HDLBP/Vigilin-Aktivität in Kontexten wie gestörtem Stoffwechsel und proliferativen Krankheitsmodellen untersucht, in denen RNA-regulatorische Netzwerke beeinträchtigt sind. Diese Eigenschaften machen Vigilin zu einem nützlichen Ziel, um RNA-zentrierte Mechanismen zu analysieren, die die Genexpressionsausgänge in humanen Zellen prägen.
Vigilin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HDLBP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HDLBP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HDLBP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HDLBP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.