Plásmido Doble Nickase (h) VDAC1/Porin: sc-418200-NIC

VDAC1 (canal aniónico dependiente de voltaje 1), también conocido como porina, es una vía principal en la membrana externa mitocondrial que media el intercambio de ATP/ADP, iones y metabolitos clave entre la mitocondria y el citosol. Al controlar la permeabilidad de la membrana externa y coordinar interacciones con la hexoquinasa y proteínas de la familia BCL-2, VDAC1 integra el metabolismo energético celular con la señalización apoptótica, la homeostasis del calcio y el equilibrio redox. La función de VDAC1 se cruza con la fosforilación oxidativa, el acoplamiento glucolítico y procesos de las membranas asociadas a mitocondria que moldean la dinámica mitocondrial y las respuestas al estrés. La expresión desregulada de VDAC1 o la actividad del canal se ha relacionado con alteraciones bioenergéticas y disfunción mitocondrial observadas en investigaciones sobre biología del cáncer, neurodegeneración y enfermedades metabólicas.

VDAC1/Porin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus VDAC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de VDAC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de VDAC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con VDAC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.