Partículas Lentivirales de Activación (m) VCAM-1: sc-423659-LAC

Vcam1 codifica la molécula de adhesión celular vascular 1 (VCAM-1), un receptor de adhesión de la superfamilia de las inmunoglobulinas que se expresa en células endoteliales activadas y en algunas poblaciones estromales e inmunitarias. VCAM-1 se une a integrinas como α4β1 (VLA-4) para mediar una adhesión firme de los leucocitos y su migración transendotelial, lo que la sitúa como un regulador clave del tráfico inflamatorio y de la vigilancia inmunitaria de los tejidos. Su expresión es inducida por programas de señalización impulsados por citocinas, incluidas las vías de NF-κB y MAPK, lo que vincula a VCAM-1 con la activación endotelial, la remodelación vascular y el reclutamiento de leucocitos. En modelos murinos, la actividad desregulada de Vcam1 se estudia ampliamente en contextos de inflamación crónica, aterosclerosis, neuroinflamación, lesión por isquemia-reperfusión y formación de nichos metastásicos.

Las partículas de activación lentiviral VCAM-1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Vcam1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral VCAM-1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Vcam1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de VCAM-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Vcam1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.