VAX2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407255

Panoramica

VAX2 (ventral anterior homeobox 2) codifica un fattore di trascrizione homeobox che regola programmi di espressione genica necessari per il patterning embrionale della retina ventrale e del peduncolo ottico. Agisce all’interno di reti trascrizionali dello sviluppo che intersecano la segnalazione dei morfogeni, incluse le gradienti di Sonic hedgehog (SHH) e dell’acido retinoico, per stabilire l’identità dorso-ventrale e le decisioni di destino del neuroepitelio. Controllando una trascrizione spazialmente ristretta nell’occhio in sviluppo, VAX2 contribuisce a coordinare la differenziazione delle cellule retiniche, la guida assonale e la formazione del nervo ottico. Un’espressione deregolata di VAX2 o alterazioni dei suoi circuiti regolatori sono state associate a malformazioni oculari congenite e a fenotipi di neurosviluppo, rendendolo un nodo utile per lo studio dello sviluppo dell’occhio umano e di vie di differenziazione rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VAX2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VAX2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VAX2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VAX2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VAX2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VAX2 per lo studio della segnalazione di VAX2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VAX2 critici per la funzione di VAX2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VAX2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VAX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VAX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VAX2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VAX2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VAX2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VAX2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VAX2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.