Plasmide CRISPR d'Activation (h) Vasorin: sc-404942-ACT

Le gène humain VASN code la vasorine, une glycoprotéine transmembranaire de type I enrichie dans les cellules musculaires lisses vasculaires, qui module la signalisation intercellulaire à la membrane plasmique. La vasorine peut se lier aux ligands de la famille du TGF-β et les séquestrer, influençant ainsi des programmes transcriptionnels dépendants des SMAD qui régissent le remodelage de la matrice extracellulaire, les changements phénotypiques et la migration. À travers ces activités, VASN est étudié dans le contexte du développement vasculaire et des réponses aux lésions, ainsi que dans des processus de remodelage dérégulé associés à la fibrose et à la signalisation stromale liée au cancer. Une expression altérée de la vasorine a été rapportée dans plusieurs contextes pathologiques où le niveau d’activité de la voie TGF-β et l’ectodomaine shedding à la surface cellulaire sont perturbés.

Vasorin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VASN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Vasorin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VASN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VASN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Vasorin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VASN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Vasorin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Vasorin dans les cellules tumorales présentant une expression de VASN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.