Plasmide CRISPR d'Activation (h) Vasohibin-2: sc-407838-ACT

VASH2 code la vasohibine‑2, un régulateur cytosolique de la dynamique des microtubules qui agit comme une carboxypeptidase de la tubuline pour générer de l’α‑tubuline détyrosinée, influençant ainsi l’organisation du fuseau, le trafic intracellulaire et la motilité cellulaire. En contrôlant les états de modifications post‑traductionnelles des microtubules, VASH2 contribue à des programmes de remodelage du cytosquelette associés à la progression du cycle cellulaire et aux phénotypes migratoires. Une expression altérée de VASH2 a été associée à des contextes de signalisation liés à l’angiogenèse et à des caractéristiques de progression tumorale dans plusieurs systèmes modèles, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique reliant la régulation des microtubules à la biologie vasculaire et invasive. Ces propriétés font de VASH2 une cible pertinente pour l’étude de la régulation du cytosquelette, du dialogue endothélium–tumeur et des changements de comportement cellulaire dépendants du microenvironnement.

Vasohibin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VASH2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Vasohibin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VASH2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VASH2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Vasohibin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VASH2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Vasohibin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Vasohibin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de VASH2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.