VAChT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401240
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- VAChT El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico VAChT, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VAChT Anticuerpo (H-10): sc-518260
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
VAChT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401240 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SLC18A3 codifica el transportador vesicular de acetilcolina (VAChT), una proteína de la membrana de las vesículas sinápticas que carga acetilcolina en vesículas secretoras aprovechando el gradiente electroquímico de protones vesicular. Este paso de empaquetamiento vesicular es esencial para la neurotransmisión colinérgica cuantificada en las uniones neuromusculares y en los circuitos colinérgicos centrales y periféricos. La función de VAChT se integra con las vías de síntesis y reciclaje de la acetilcolina, acoplando el ciclo presináptico de las vesículas a la exocitosis regulada y a la señalización sináptica. La alteración del tono colinérgico vinculada a una disrupción del almacenamiento de acetilcolina se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, disfunción autonómica y trastornos que afectan el control motor y la cognición.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO VAChT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC18A3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC18A3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC18A3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VAChT.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC18A3 para la investigación de la señalización de VAChT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SLC18A3 críticos para la función de VAChT
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC18A3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido VAChT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VAChT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC18A3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VAChT (h) y el plásmido HDR VAChT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC18A3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC18A3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.