V-ATPase D1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419255

Descripción general

Atp6v0d1 codifica la subunidad D1 del dominio V0 de la H\+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa), una bomba de protones que impulsa la acidificación de endosomas, lisosomas y otros compartimentos intracelulares en células de ratón. La regulación del pH dependiente de la V-ATPasa sostiene la endocitosis mediada por receptores, el flujo autofágico, la proteólisis lisosomal y el tráfico de membranas, y también contribuye a la homeostasis de los orgánulos acoplada a la detección de nutrientes por mTORC1. La alteración de componentes de la V-ATPasa se asocia de forma amplia con defectos en la clasificación vesicular, disminución de la capacidad degradativa y cambios en las salidas de señalización que pueden influir en la neurodegeneración, la función de las células inmunitarias y la adaptación metabólica asociada al cáncer. Por lo tanto, Atp6v0d1 es un nodo útil para estudiar cómo la acidificación de los orgánulos se cruza con la proteostasis y las vías de respuesta al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO V-ATPase D1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Atp6v0d1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Atp6v0d1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Atp6v0d1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína V-ATPase D1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Atp6v0d1 para la investigación de la señalización de V-ATPase D1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Atp6v0d1 críticos para la función de V-ATPase D1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Atp6v0d1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido V-ATPase D1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido V-ATPase D1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Atp6v0d1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR V-ATPase D1 (m) y el plásmido HDR V-ATPase D1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Atp6v0d1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Atp6v0d1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.