V-ATPase C1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402679-NIC

ATP6V1C1 kodiert die C1‑Untereinheit der humanen vakuolären H+-ATPase (V‑ATPase) im V1‑Domänenbereich, eine zentrale Komponente des zytosolischen, ATP‑hydrolysierenden Sektors, der die Protonentranslokation über Endomembranen und die Plasmamembran antreibt. Die durch V‑ATPase vermittelte Ansäuerung ist entscheidend für die Reifung von Endosomen zu Lysosomen, rezeptorvermittelte Endozytose, den autophagischen Flux und den vesikulären Transport und unterstützt die pH‑abhängige Verarbeitung von Makromolekülen innerhalb der sekretorischen und degradativen Signalwege. Über die Regulation des Organellen‑pH und die Kopplung an Nährstoffsensor‑Netzwerke wie mTORC1 am Lysosom beeinflusst die V‑ATPase‑Aktivität den Zellstoffwechsel, Stressantworten und den Umsatz von Membranproteinen. Eine fehlregulierte V‑ATPase‑Funktion und eine veränderte pH‑Homöostase der Kompartimente wurden mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Neurodegeneration, Invasion von Tumorzellen/metastatisches Potenzial sowie Defekte in der Antigenverarbeitung und Immun-Signalgebung relevant sind, wodurch ATP6V1C1 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur ansäuerungsabhängigen Biologie darstellt.

V-ATPase C1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP6V1C1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP6V1C1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP6V1C1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP6V1C1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.