Plásmido Doble Nickase (h) V-ATPase α1: sc-403882-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)V-ATPase α1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa V-ATPase α1 (h) y el plásmido de doble nickasa V-ATPase α1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATP6V1A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: V-ATPase α1 Anticuerpo (4F5): sc-293336
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) V-ATPase α1 | sc-403882-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) V-ATPase α1 | sc-403882-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1A codifica la subunidad catalítica A del dominio V1 de la H+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa) α1, un componente central de la bomba de protones impulsada por ATP que acidifica endosomas, lisosomas y vesículas secretoras. Al controlar el pH de los orgánulos, la V-ATPasa α1 favorece la endocitosis mediada por receptores, el flujo autofágico, la degradación lisosomal, el tráfico vesicular y el acoplamiento al sistema de detección de nutrientes mTORC1 en la superficie lisosomal. Una actividad adecuada de la V-ATPasa también es necesaria para el procesamiento de proteínas y lípidos en el Golgi y en endosomas, lo que influye en la presentación de antígenos y en el recambio de señales. La acidificación dependiente de la V-ATPasa desregulada se ha vinculado con la neurodegeneración, la adaptación metabólica e invasión de células tumorales, y defectos en la proteostasis y la función sináptica, lo que convierte a ATP6V1A en una diana útil para estudios mecanísticos centrados en vías.
V-ATPase α1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP6V1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP6V1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP6V1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP6V1A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.