Plasmide CRISPR d'Activation (h) Uteroglobin/SCGB1A1/CC10: sc-400381-ACT

SCGB1A1 code l’utéroglobine (également appelée CC10), une protéine sécrétée de la famille des sécrétoglobines, produite principalement par les cellules club des voies aériennes et d’autres épithéliums muqueux. Cette petite protéine homodimérique contribue à l’homéostasie épithéliale en modulant la signalisation inflammatoire, en limitant le stress oxydatif et en influençant le métabolisme des phospholipides et des eicosanoïdes dans le liquide de surface des voies aériennes. L’expression de SCGB1A1 est étroitement liée aux programmes de différenciation épithéliale et est fréquemment utilisée comme marqueur de l’identité des cellules club et du remodelage des voies aériennes. Des niveaux altérés de SCGB1A1 ont été associés à des affections inflammatoires chroniques des voies aériennes et à des réponses à des lésions épithéliales, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la fonction de barrière muqueuse et de la régulation de l’inflammation.

Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SCGB1A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SCGB1A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SCGB1A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Uteroglobin/SCGB1A1/CC10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SCGB1A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 dans les cellules tumorales présentant une expression de SCGB1A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.