Plasmide CRISPR d'Activation (m) USP18: sc-423988-ACT

Usp18 code pour l’ubiquitine‑spécifique peptidase 18 (USP18), une isopeptidase induite par l’interféron qui retire ISG15 des protéines conjuguées et agit comme un régulateur négatif majeur de la signalisation des interférons de type I. En modulant la dynamique de l’ISGylation et en atténuant l’activité de la voie JAK–STAT via des interactions avec le complexe du récepteur de l’interféron, USP18 façonne l’activation de l’immunité innée, les réponses antivirales et les programmes transcriptionnels associés à l’inflammation. Dans les modèles murins, une activité altérée d’USP18 est liée à une dérégulation de l’expression des gènes stimulés par l’interféron et de l’homéostasie immunitaire, ce qui étaye son intérêt pour les études de biologie des infections, d’auto‑immunité et de signalisation au sein du microenvironnement tumoral‑immunitaire.

USP18 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Usp18 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USP18 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Usp18 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Usp18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USP18. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Usp18 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USP18 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USP18 dans les cellules tumorales présentant une expression de Usp18 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.