Plasmide CRISPR/Cas9 KO USP12 (h): sc-406586

Présentation

USP12 (ubiquitin specific peptidase 12) est une enzyme de désubiquitination qui régule la stabilité des protéines et la signalisation en retirant des chaînes d’ubiquitine de substrats sélectionnés. Elle intervient dans le contrôle ubiquitine‑dépendant de l’homéostasie cellulaire, en influençant des processus tels que le trafic des récepteurs, les réponses au stress et la protéostasie, via la modulation de la dynamique du système ubiquitine–protéasome. L’activité de USP12 a été associée à la régulation de nœuds clés de signalisation, notamment des voies liées à AKT et à la signalisation du récepteur aux androgènes, ce qui la relie à un contrôle dépendant du contexte de la prolifération et des programmes transcriptionnels. Un dérèglement de l’expression ou de la fonction de USP12 a été associé à la biologie tumorale et à d’autres troubles où une « édition » anormale de l’ubiquitination perturbe l’amplitude des signaux et le renouvellement des protéines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO USP12 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène USP12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du USP12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert USP12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine USP12.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en USP12 pour l'étude de la signalisation de USP12, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de USP12 essentiels à la fonction de USP12
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de USP12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le USP12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le USP12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus USP12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le USP12 plasmide HDR (h) et le USP12 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie USP12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles USP12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.