Plasmide CRISPR d'Activation (h) USP11: sc-403368-ACT

USP11 (ubiquitin specific peptidase 11) est une enzyme déubiquitinante qui modifie les chaînes d’ubiquitine afin de réguler la stabilité des protéines, leur localisation et la dynamique des voies de signalisation. Elle contribue au contrôle, dépendant de l’ubiquitine, des réponses aux dommages de l’ADN, des processus associés à la chromatine et de la progression du cycle cellulaire en modulant l’état d’ubiquitination de composants clés des voies concernées. Par ces activités, USP11 influence le maintien du génome et les réseaux de signalisation du stress, fréquemment perturbés dans les maladies humaines. Une expression ou une fonction dérégulée de USP11 a été associée à une altération de l’activité de ces voies en biologie du cancer et dans d’autres contextes où la protéostasie médiée par l’ubiquitine et les mécanismes de réparation sont essentiels.

USP11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de USP11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USP11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus USP11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription USP11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USP11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus USP11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USP11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USP11 dans les cellules tumorales présentant une expression de USP11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.