Plasmide CRISPR d'Activation (h) USF-2: sc-401713-ACT

Le gène humain **USF2** (*upstream stimulatory factor 2*) code **USF-2**, un facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique à fermeture éclair à leucines, qui se lie aux motifs **E-box** afin de coordonner des programmes d’expression génique contrôlant la prolifération, la différenciation, le métabolisme et les réponses cellulaires au stress. USF-2 participe à la régulation transcriptionnelle en aval de la signalisation liée aux **MAPK** et interagit avec la machinerie de modification de la chromatine pour ajuster l’activité des promoteurs dans divers types cellulaires. Une activité dérégulée d’USF2 a été associée à une altération du contrôle du cycle cellulaire, à une reprogrammation métabolique et à des états transcriptionnels inflammatoires rapportés dans des contextes de cancer et de maladies cardiométaboliques. Ces caractéristiques font d’USF-2 un nœud utile pour des études mécanistiques des réseaux transcriptionnels et des interactions entre voies de signalisation.

USF-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de USF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USF-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus USF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription USF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USF-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus USF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USF-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USF-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de USF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.