Plasmide CRISPR d'Activation (m) USF-1: sc-423628-ACT

Le facteur stimulateur amont 1 (Usf1) code le facteur de transcription USF-1, une protéine de type hélice‑boucle‑hélice basique à fermeture éclair à leucines, qui se lie à des motifs E‑box afin de coordonner des programmes d’expression génique contrôlant le métabolisme cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. Dans les cellules de souris, USF-1 intègre les signaux nutritionnels et hormonaux pour réguler l’homéostasie des lipides et du glucose, les voies mitochondriales et oxydatives, ainsi que des réseaux transcriptionnels associés au rythme circadien. Par son activité au niveau des promoteurs et des enhancers, USF-1 influence l’accessibilité de la chromatine et la production transcriptionnelle dans les tissus métaboliques et dans des contextes pertinents pour l’immunité. Une activité dérégulée de USF1/USF-1 a été associée à des phénotypes cardiométaboliques, notamment une modification de la gestion des lipoprotéines et de la sensibilité à l’insuline, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques de la biologie des maladies métaboliques.

USF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Usf1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Usf1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Usf1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USF-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Usf1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USF-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USF-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Usf1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.