Plasmide CRISPR/Cas9 KO UPIIIa (m): sc-423622

Présentation

Upk3a code l’uroplakine IIIa (UPIIIa), un composant de type tétraspanine de la membrane apicale de l’urothélium, qui participe à l’assemblage des plaques d’uroplakines et au maintien de la barrière de perméabilité des voies urinaires. UPIIIa forme des complexes avec d’autres uroplakines afin de soutenir la différenciation terminale des cellules « parapluie » (umbrella cells) et de réguler le trafic membranaire ainsi que la stabilité mécanique lors du remplissage et de la vidange de la vessie. Une altération de la composition des uroplakines peut compromettre l’intégrité épithéliale, modifier les programmes de différenciation urothéliale et favoriser des réponses inflammatoires associées à des dysfonctionnements des voies urinaires. Dans des modèles murins, Upk3a est utilisé pour étudier les voies qui gouvernent la formation de la barrière épithéliale, le remodelage urothélial et les interactions hôte–pathogène à la surface vésicale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UPIIIa (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Upk3a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Upk3a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Upk3a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UPIIIa.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Upk3a pour l'étude de la signalisation de UPIIIa, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Upk3a essentiels à la fonction de UPIIIa
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Upk3a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UPIIIa plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UPIIIa plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Upk3a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UPIIIa plasmide HDR (m) et le UPIIIa (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Upk3a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Upk3a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.