UPIb Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423620

Descripción general

Upk1b codifica la uroplaquina Ib (UPIb), una proteína de membrana tipo tetraspanina que se ensambla con otras uroplaquinas para formar las placas asimétricas de la membrana plasmática de las células “paraguas” (umbrella) del urotelio diferenciado. Estas placas sustentan la organización de la membrana apical, la integridad de la barrera y los procesos de tráfico vesicular que regulan la remodelación de la superficie vesical durante la distensión y la micción. UPIb participa en programas de diferenciación epitelial y en la organización de microdominios de membrana, vinculando la arquitectura del citoesqueleto con la estabilidad de las uniones celulares y de las proteínas de superficie. Los patrones alterados de expresión de uroplaquinas se utilizan ampliamente como indicadores del estado urotelial y son relevantes para estudios de disfunción de barrera, inflamación y transformación del urotelio.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UPIb (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Upk1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Upk1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Upk1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UPIb.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Upk1b para la investigación de la señalización de UPIb, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Upk1b críticos para la función de UPIb
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Upk1b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UPIb CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UPIb CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Upk1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UPIb (m) y el plásmido HDR UPIb (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Upk1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Upk1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.