Plasmide CRISPR d'Activation (h) UNC93B1: sc-404369-ACT

UNC93B1 (UNC93 homologue B1) est une protéine membranaire du réticulum endoplasmique qui contrôle le trafic et la compétence de signalisation des récepteurs Toll‑like détecteurs d’acides nucléiques, notamment TLR3, TLR7, TLR8 et TLR9. En chaperonnant ces récepteurs du RE vers les compartiments endolysosomaux, UNC93B1 contribue à définir le seuil d’activation de l’interféron de type I et de la voie NF‑κB en aval des acides nucléiques associés aux agents pathogènes et aux dommages. Une fonction altérée d’UNC93B1 peut perturber la détection innée, la production de cytokines et l’activation des cellules présentatrices d’antigènes, ce qui la relie à une dérégulation immunitaire et à une susceptibilité à des phénotypes inflammatoires induits par l’infection. En tant que régulateur de la compartimentation endosomale des TLR, UNC93B1 est fréquemment étudiée dans des modèles de monocytes, de cellules dendritiques, de lymphocytes B et d’épithéliums afin de disséquer les circuits de l’immunité innée.

UNC93B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UNC93B1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UNC93B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UNC93B1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UNC93B1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UNC93B1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UNC93B1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UNC93B1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UNC93B1 dans les cellules tumorales présentant une expression de UNC93B1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.