Plasmide CRISPR d'Activation (h) UGT1A1: sc-401190-ACT

UGT1A1 code une UDP‑glucuronosyltransférase microsomale qui catalyse la glucuronidation de la bilirubine et de divers composés endogènes lipophiles, augmentant leur solubilité afin de permettre leur excrétion biliaire. Cette enzyme de conjugaison de phase II intervient dans des réseaux de détoxification hépatiques et extra‑hépatiques et s’articule avec la signalisation de réponse aux xénobiotiques, qui régule le métabolisme et l’élimination. Des variations ou une diminution de l’expression de UGT1A1 sont associées à une conjugaison déficiente de la bilirubine et à des phénotypes d’hyperbilirubinémie, et l’activité de UGT1A1 est également un déterminant majeur du devenir métabolique de nombreuses petites molécules. Par conséquent, UGT1A1 est largement utilisé pour étudier la régulation de la capacité de glucuronidation, l’homéostasie métabolique hépatique et les différences interindividuelles des voies de conjugaison.

UGT1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UGT1A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UGT1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UGT1A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UGT1A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UGT1A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UGT1A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UGT1A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UGT1A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de UGT1A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.