Plásmido Doble Nickase (m) UGCG: sc-423600-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)UGCG consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa UGCG (m) y el plásmido de doble nickasa UGCG (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ugcg. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: UGCG Anticuerpo (1E5): sc-293235
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) UGCG | sc-423600-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen **Ugcg** en el ratón codifica la **glucosiltransferasa de ceramida UDP-glucosa (UGCG)**, una enzima residente del aparato de Golgi que cataliza el primer paso de glicosilación que convierte la ceramida en **glucosilceramida**, iniciando así la biosíntesis de **glicoesfingolípidos**. Mediante el control de las reservas celulares de ceramida y de la producción posterior de **gangliósidos** y **globósidos**, UGCG influye en la composición de los microdominios de membrana, el tráfico vesicular y la señalización mediada por receptores. La alteración de la actividad de UGCG perturba la homeostasis de los esfingolípidos y se ha relacionado con defectos en el metabolismo lipídico, en la señalización inmune e inflamatoria y con cambios en las respuestas celulares al estrés relevantes para fenotipos metabólicos y neurobiológicos. Como regulador clave de la vía, UGCG se estudia ampliamente por su papel en la modulación de la sensibilidad a la apoptosis, los programas de diferenciación y las redes de señalización dependientes de membrana.
UGCG El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ugcg en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ugcg. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ugcg. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ugcg alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.