Plásmido CRISPR de Activación (h) UGCG: sc-403055-ACT

El UGCG humano codifica la glucosiltransferasa de ceramida UDP‑glucosa, una glicosiltransferasa localizada en el aparato de Golgi que cataliza el primer paso comprometido en la biosíntesis de los glicoesfingolípidos al convertir la ceramida en glucosilceramida. Esta reacción regula el equilibrio celular de ceramida y favorece la producción posterior de glicoesfingolípidos complejos que influyen en la organización de los microdominios de membrana, la señalización de receptores, el tráfico vesicular y las interacciones célula–célula. La actividad de UGCG se integra con el metabolismo de los esfingolípidos y las vías de respuesta al estrés, modulando procesos como la diferenciación, la susceptibilidad a la apoptosis y la señalización inflamatoria. La homeostasis alterada de glicoesfingolípidos en la que participa UGCG se ha asociado con fenotipos neurodegenerativos y metabólicos, y se ha estudiado en contextos oncológicos donde la señalización lipídica modificada puede modular la proliferación y la respuesta a fármacos.

UGCG El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UGCG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UGCG El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UGCG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UGCG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UGCG. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UGCG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UGCG en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UGCG en células tumorales con expresión de UGCG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.