Plásmido Doble Nickase (h) UDG: sc-403189-NIC

El gen UNG humano codifica la uracil-ADN glicosilasa (UDG), un iniciador clave de la reparación por escisión de bases que elimina el uracilo del ADN derivado de la desaminación de citosina o de la incorporación errónea de dUTP. Al generar sitios abásicos que posteriormente son procesados por endonucleasas AP, polimerasas y ligasas, UNG ayuda a mantener la integridad del genoma durante la replicación y la reparación del ADN. La actividad de UNG también se relaciona con los procesos de diversificación de anticuerpos en las células B al modular el procesamiento de lesiones de uracilo introducidas durante la hipermutación somática y la recombinación de cambio de clase. La desregulación del procesamiento del uracilo y el deterioro de la reparación por escisión de bases se han vinculado con un aumento de la carga mutacional y con fenotipos de inestabilidad genómica relevantes para la biología del cáncer y para modelos de daño del ADN asociado a la inflamación.

UDG El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus UNG en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de UNG. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de UNG. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con UNG alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.