UCP4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-417530-NIC

SLC25A27 codifica a proteína desacopladora 4 (UCP4), um transportador da membrana interna mitocondrial que modula o vazamento de prótons e a eficiência de acoplamento mitocondrial, moldando a produção da fosforilação oxidativa e a homeostase de espécies reativas de oxigênio. A UCP4 é enriquecida em tecidos neurais e está ligada à regulação do potencial de membrana mitocondrial, ao manejo de cálcio e às respostas ao estresse celular que influenciam o metabolismo e a sobrevivência neuronal. Por meio de seus efeitos na bioenergética mitocondrial, a UCP4 se cruza com vias que governam o equilíbrio redox e a morte celular programada, tornando-a relevante para estudos de neurodegeneração e vulnerabilidade metabólica. Alterações na expressão ou atividade da UCP4 têm sido associadas à desregulação da homeostase energética em contextos relevantes para doenças, apoiando investigações mecanísticas em modelos de células humanas.

UCP4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SLC25A27 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SLC25A27. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SLC25A27. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SLC25A27 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.