UCP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417530-ACT

O SLC25A27 humano codifica a proteína desacopladora 4 (UCP4), um transportador da membrana interna mitocondrial que modula a condutância de prótons para ajustar finamente a eficiência da fosforilação oxidativa e o potencial de membrana mitocondrial. A atividade da UCP4 influencia o balanço energético celular, o manejo de espécies reativas de oxigênio e o metabolismo adaptativo ao estresse, particularmente em tecidos com alta demanda bioenergética. Por meio do seu impacto no acoplamento mitocondrial e na homeostase redox, a UCP4 é estudada em vias ligadas à resiliência neuronal, à falha bioenergética e à reprogramação metabólica associada à inflamação. Alterações na expressão de UCP4 têm sido associadas a fenótipos de disfunção mitocondrial relevantes para a neurodegeneração e outros distúrbios caracterizados por comprometimento da bioenergética mitocondrial.

UCP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC25A27 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UCP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC25A27 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC25A27, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UCP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC25A27 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UCP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UCP4 em células tumorais com expressão de SLC25A27 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.