Plásmido Doble Nickase (m) Ubr4: sc-427303-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Ubr4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Ubr4 (m) y el plásmido de doble nickasa Ubr4 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ubr4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Ubr4 Anticuerpo (21-Y): sc-100615
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Ubr4 | sc-427303-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Ubr4 | sc-427303-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El Ubr4 de ratón codifica una ligasa E3 de ubiquitina que participa en la vía de la regla del extremo N (N-end rule) del sistema ubiquitina–proteasoma, vinculando el reconocimiento de sustratos con la proteostasis y el recambio regulado de proteínas. UBR4 se ha implicado en el tráfico endocítico, la homeostasis de proteínas de membrana y un control más amplio, dependiente de la ubiquitina, de las respuestas celulares al estrés. A través de estas funciones, UBR4 influye en la supervivencia celular, la diferenciación y procesos neuronales y del desarrollo en los que se requiere una degradación proteica estrictamente controlada. La desregulación de la ubiquitinación y de las redes de proteostasis que involucran ligasas de la familia UBR es relevante para estudios de neurobiología, fenotipos cardiometabólicos y vulnerabilidades de señalización asociadas al cáncer en sistemas modelo.
Ubr4 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ubr4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ubr4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ubr4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ubr4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.