Plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2O (h): sc-410610

Présentation

UBE2O code une enzyme de conjugaison de l’ubiquitine hybride E2/E3 qui assure le transfert de l’ubiquitine vers des protéines substrats, reliant l’ubiquitination à la protéostasie et au contrôle qualité des protéines. Elle participe à la régulation de voies associées à la traduction, au remodelage des complexes protéiques en réponse au stress et aux transitions d’état cellulaire en ciblant certaines protéines pour une dégradation dépendante de l’ubiquitine. Par son influence sur la signalisation par l’ubiquitine et la stabilité de régulateurs clés, UBE2O a été étudiée dans des contextes incluant des altérations de l’homéostasie du protéome, l’adaptation métabolique et des programmes liés au cycle cellulaire ou à la différenciation. Une activité d’UBE2O dérégulée et des dynamiques d’ubiquitination anormales sont fréquemment examinées dans le cancer et d’autres maladies caractérisées par une dégradation protéique perturbée et des réponses au stress altérées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2O (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UBE2O dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UBE2O, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UBE2O à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UBE2O.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UBE2O pour l'étude de la signalisation de UBE2O, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UBE2O essentiels à la fonction de UBE2O
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UBE2O pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UBE2O plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UBE2O plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UBE2O. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UBE2O plasmide HDR (h) et le UBE2O (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UBE2O pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UBE2O définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.