Plasmide Double Nickase (m) UBE2F: sc-426826-NIC

Ube2f chez la souris code UBE2F, une enzyme E2 de conjugaison qui soutient la neddylation en transférant NEDD8 aux ligases culline‑RING, avec une forte association à l’axe CUL5–RBX2. Par cette voie, UBE2F contribue à une modification de type ubiquitine qui ajuste la reconnaissance des substrats et leur renouvellement, influençant la protéostasie, la progression du cycle cellulaire et la signalisation d’adaptation au stress. La perturbation de la neddylation dépendante d’UBE2F peut modifier l’activité des CRL ainsi que les programmes transcriptionnels et apoptotiques en aval, faisant de Ube2f un nœud utile pour étudier la dérégulation de l’homéostasie protéique dans des contextes pertinents pour le cancer et les neurosciences. Dans les modèles murins, Ube2f est donc fréquemment étudié afin de relier la dynamique de la voie NEDD8 à des changements d’amplitude des signaux et à la dégradation sélective des protéines.

UBE2F Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ube2f dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ube2f. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ube2f. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ube2f.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.