Plasmide Double Nickase (h) UBE2F: sc-406582-NIC

UBE2F humain code une enzyme de conjugaison E2 qui achemine NEDD8 vers des substrats de type culline, soutenant l’assemblage et la régulation des ligases culline–RING ainsi que la protéostasie ubiquitine‑dépendante en aval. En modulant l’état de neddylation de cullines spécifiques, UBE2F influence la dégradation de régulateurs clés de la progression du cycle cellulaire, des réponses au stress et de la signalisation des dommages à l’ADN, avec des répercussions sur les programmes transcriptionnels et l’homéostasie cellulaire. Les dérégulations des voies ubiquitine–protéasome et de neddylation sont fréquemment impliquées dans la transformation oncogénique et dans une tolérance au stress altérée, faisant d’UBE2F un nœud d’intérêt pour des études mécanistiques du contrôle qualité des protéines et des interactions entre voies de signalisation. L’étude fonctionnelle d’UBE2F peut aider à préciser comment la neddylation sélective des cullines oriente la reconnaissance des substrats et les sorties protéolytiques dans les cellules humaines.

UBE2F Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UBE2F dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UBE2F. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UBE2F. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UBE2F.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.