UBE2E1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423577

Übersicht

Ube2e1 kodiert UBE2E1, ein ubiquitinkonjugierendes E2-Enzym, das mit E3-Ligasen zusammenarbeitet, um Ubiquitin auf Substratproteine zu übertragen und so Proteostase und Proteinumsatz zu steuern. Über seine Rolle in der Ubiquitinierung trägt UBE2E1 zur Regulation der Zellzyklusprogression, von DNA-Schadensantworten und stressadaptiver Signalwege bei, indem es Stabilität und Aktivität zentraler regulatorischer Proteine moduliert. Störungen der E2-Enzymaktivität können die ubiquitinabhängige Qualitätskontrolle und Signalnetzwerke beeinträchtigen – Prozesse, die häufig mit Neurodegeneration, Entzündung und onkogener Transformation in Verbindung stehen. In Mausmodellen stellt Ube2e1 einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um Spezifität in Ubiquitin-Signalwegen sowie Redundanzen innerhalb der E2-Familie in gewebespezifischen und krankheitsrelevanten Kontexten zu analysieren.

Das UBE2E1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ube2e1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ube2e1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ube2e1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UBE2E1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ube2e1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UBE2E1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ube2e1-Exone abzielen, die für die UBE2E1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ube2e1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UBE2E1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UBE2E1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ube2e1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UBE2E1 HDR-Plasmid (m) und UBE2E1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ube2e1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ube2e1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.